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关于力辰(LICHEN) DYCP-31DN 电泳仪电泳条带歪斜不整齐的诊断分析与矫正方法
理想的电泳结果应呈现为笔直、平行的条带。当条带出现整体倾斜、波浪状弯曲或“微笑/皱眉”(两端弯曲)等现象时,统称为条带歪斜不整齐。这不仅是美观问题,更反映了电泳过程中电场、热场或凝胶系统存在不均匀性,会影响分子量判断和定量分析的准确性。
条带歪斜的成因诊断图谱
不同形态的歪斜指向不同的根本原因,需进行“形态学”诊断:
整体单向倾斜(所有条带向同一方向倾斜):
凝胶底部不平:制胶时,凝胶底部聚合不均,或与制胶板底部密封条接触不良,导致凝胶厚度在水平方向不一致。厚处电阻大、电场弱,样品跑得慢;薄处则快。
电极问题:两侧电极污染程度不一致或其中一侧接触不良,导致两侧电场强度不同。
缓冲液液位或浓度不均:两侧缓冲液槽的液面高度或缓冲液离子强度存在差异。
“微笑”或“皱眉”效应(条带两端向上或向下弯曲):
发热不均(最常见原因):凝胶中部比两侧散热慢,导致中部温度高于两侧。温度高则迁移速率快,形成“微笑”条带(尤其在电压较高时)。反之,在某些特殊装置或条件下,也可能出现“皱眉”。
凝胶两端与玻璃板粘连:凝胶在聚合时,两端与玻璃板侧壁粘连过紧,在电泳发热膨胀时受到横向束缚,导致中间部分纵向拉伸更明显。
波浪状或随机扭曲:
样品盐浓度过高:上样样品中含有高浓度的盐离子,在样品进入分离胶的瞬间,局部导电性剧增,导致电场线扭曲,形成波浪状条带。
凝胶中有气泡或杂质:凝胶内部存在气泡或未溶解的固体颗粒,会局部干扰电场和泳动路径。
上样孔底部不平或有残留胶丝:样品未能从同一水平线开始泳动。
系统性矫正与优化方案
针对整体倾斜:
确保制胶均匀:灌胶时保持制胶板水平放置。严格按照操作规程进行底部密封和灌胶,可进行水封测试检查漏液。
维护电极一致性:定期、同步清洁两个电极。检查电极连接是否都牢固。
平衡缓冲系统:确保两侧缓冲液槽使用同一批次、等体积的缓冲液,并保持液面高度一致。对于循环使用缓冲液,需注意其消耗的均一性。
针对“微笑/皱眉”效应:
有效散热,控制温度:这是最根本的解决之道。采用以下一种或多种组合:
降低运行电压:在保证分辨率的前提下,采用相对较低的恒压条件。
使用冷却系统:如果力辰(LICHEN) DYCP-31DN 电泳仪支持,开启内置冷却循环功能,或将整个电泳槽置于冰水浴中运行。
确保凝胶与玻璃板贴合良好:制胶时,确保玻璃板洁净,凝胶聚合收缩后能与玻璃板均匀贴合,避免局部空腔影响散热。
使用薄胶:与厚胶相比,薄胶(如0.75mm)散热更佳。
针对波浪扭曲:
纯化或处理样品:上样前,通过透析、脱盐柱或沉淀法降低样品中的盐浓度。使用与凝胶缓冲系统相容的上样缓冲液。
细心制备凝胶:确保胶液完全溶解、无颗粒,灌胶时避免引入气泡。
精心处理上样孔:拔梳后,用缓冲液或注射器针头仔细冲洗上样孔,清除残留的碎胶。上样前确保孔内无气泡。
条带的形态是电泳过程的“健康指示器”。通过细致的观察和针对性的优化,可以获得既美观又科学的电泳图谱。
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